摘  要：采用一種與人體胃生理學(xué)環(huán)境相接近的體外模擬試驗(yàn)條件提取中藥化學(xué)成分。以人參超微粉為原料，分別以仿生溶媒及水作為提取溶劑，置37℃水浴中，攪拌提取1小時(shí)，經(jīng)正丁醇萃取分離，得人參皂苷類成分。采用高效液相色譜法，測(cè)定二種提取物中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re含量之和，并分析高效液相色譜圖特征，結(jié)果仿生化提取物中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re含量之和高于水提取物，并且仿生化提取物色譜圖中顯示有新成分產(chǎn)生。
關(guān)鍵詞：人參皂苷； 仿生化；提取； 高效液相色譜法
    人參為五加科植物人參Panax  ginseng  C. A. Meyer.的干燥根及根莖，人參皂苷為人參主要成分之一。傳統(tǒng)溶劑法以水、乙醇等親水性溶劑作為提取溶劑，采用煎煮法、滲漉法、回流提取法等方法進(jìn)行提取，近年來許多新的提取技術(shù)用于人參皂苷提取，如超聲提取法、微波提取法、超臨界二氧化碳提取法及超高壓提取法等[1][2]。上述提取方法的原理主要基于化學(xué)浸提的“相似者相溶”原則而進(jìn)行的，提取溶劑、條件與人體消化系統(tǒng)的生理?xiàng)l件有很大差別，因此得到的“有效成分或部位”存在體外有效，但進(jìn)入體內(nèi)卻無效的現(xiàn)象，而有些在體外無效的成分卻被作為雜質(zhì)棄去或根本沒有從中藥中提取出來，但這些成分可能在體內(nèi)胃腸液作用下發(fā)生轉(zhuǎn)化或代謝，而其轉(zhuǎn)化的成分或代謝產(chǎn)物具有良好活性，而且易于被吸收入血發(fā)揮作用，因此傳統(tǒng)方法篩選有效成分的效率很低，浪費(fèi)巨大。基于口服藥物的體內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)過程，本研究提出仿生化提取構(gòu)想，即建立一種與人體胃腸生理學(xué)環(huán)境相接近的胃腸道模擬法，提取條件較化學(xué)浸提法更接近人體真實(shí)的胃腸生理?xiàng)l件，提取溶劑依據(jù)胃液及腸液組成，人工配制成系列提取溶媒，提取溫度在37℃，攪拌動(dòng)態(tài)提取。實(shí)際上國外在胃腸系統(tǒng)的體外模擬實(shí)驗(yàn)已成為一種非常有效的評(píng)估污染物有效性的方法，目前國際上已有十余種胃腸模擬方法[3]。本次研究以人參超微粉為原料，分別以仿生溶媒和水為提取溶劑，以人參皂苷Rgl和人參皂苷Re含量之和為考察指標(biāo)，提取人參皂苷類成分，為仿生化提取中藥化學(xué)成分可行性提供科學(xué)依據(jù)。
    一、材料與方法
    1.1 材料與試劑
    人參藥材采于吉林省撫松市，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定室鑒定為五加科植物人參Panax Ginseng C. A. Mey. 的干燥根，粉碎成超微粉（300目），備用。人參皂苷Re對(duì)照品（批號(hào)110754-200822）、人參皂苷Rg1對(duì)照品（批號(hào)110703-200221），供含量測(cè)定用 購于中國藥品生物制品檢定所；胃蛋白酶（1:3000  上海源葉生物科技有限公司）；乙腈（美國Fisher,色譜純）；水為蒸餾水（實(shí)驗(yàn)室自制）；其他試劑均為分析純。
    1.2 儀器
    島津LC-10AT高效液相色譜儀 ；檢測(cè)器：SPD-10 Av；三用紫外分析儀ZF-6（上海嘉鵬科技有限公司）；BMF-6超微粉碎機(jī)（濟(jì)南倍力粉工程有限公司）；飛鴿 LXJ-ⅡB低速大容量多管離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；中興 DZKW-4電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；KQ-250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；7321型電動(dòng)攪拌機(jī)調(diào)速器（上海標(biāo)本模型廠）。
    1.3 試驗(yàn)方法
    1.3.1仿生化提取及水提取方法
    取人參藥材，60℃真空干燥，超微粉碎，過300目篩，備用。仿生提取溶媒由0.2%氯化鈉、0.32%胃蛋白酶及0.7%鹽酸配制成溶液。
    稱取人參超微粉4.0g，加入仿生溶媒100ml，置37℃水浴中，攪拌，提取1小時(shí)，離心，上清液用水飽和正丁醇振搖提取3次，合并正丁醇液，減壓回收，低溫真空干燥，得人參仿生化提取物。
    稱取人參超微粉4.0g，加水100ml，置37℃水浴中，攪拌，提取1小時(shí)，離心，上清液用水飽和正丁醇振搖提取3次，合并正丁醇液，減壓回收，低溫真空干燥，得人參水提取物。
    1.3.2 人參皂苷Rg1和人參皂苷Re含量測(cè)定方法[4]
    1）色譜條件  色譜柱：Zorbax XDB-C18(4.6mm×250mm，5m)；填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸溶液（20:80）；流速：1.0ml•min－1；檢測(cè)波長：203nm；柱溫：室溫。理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算不低于6000。
    2）對(duì)照品溶液制備  精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml分別含人參皂苷Rg1 0.24mg、人參皂苷Re0.36mg的混合對(duì)照品溶液，搖勻，即得。
    3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
    分別精密吸取2l 、5l 、10l、15l、20l對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，記錄其峰面積積分值，分別以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re濃度（g）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：人參皂苷Rg1為Y=1323.7X-15395,r=0.9998；人參皂苷Re為Y=1659.4X+5200.8,r=0.9999。結(jié)果表明，人參皂苷Rg1在0.48～4.8g，人參皂苷Re在0.72～7.2g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。液相色譜圖見圖1。.
    二、結(jié)果與分析
    2.1 不同提取方法提取率的比較
    分別取人參皂苷仿生化提取物及水提取物適量，精密稱定，置容量瓶中，加甲醇超聲溶解，稀釋至刻度，制成每1mg/ml的溶液，搖勻，經(jīng)微孔濾膜（0.45m）濾過，作為供試品溶液。分別精密吸取二種供試品溶液10l，注入液相色譜儀，依上法測(cè)定，得峰面積，外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量，并計(jì)算提取率。計(jì)算結(jié)果見表1，液相色譜圖見圖2、圖3。.
    2.2 結(jié)果分析
    含量測(cè)定結(jié)果表明，以人參皂苷Rg1與人參皂苷Re含量之和為指標(biāo)，提取人參中皂苷類成分，仿生化提取法的提取率高于相同條件下以水作為提取溶劑；并且通過比較高效液相色譜圖，仿生法得到的提取物色譜圖在人參皂苷Rg1和人參皂苷Re前后分別出現(xiàn)新的色譜峰，提示在該提取條件下可能有成分轉(zhuǎn)化或是未被水提取出來的成分，對(duì)該成分的確定有待進(jìn)一步研究。